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再用蒸馏水将孢子制成悬浮液继续培养，通过搅拌，在同时稍微提高点室内温度，然后将青霉菌培养液继续添加适量的培养基。
难的是青霉素的提取精制，必须将青霉素发酵液冷却，过滤。
首先加上菜籽油并搅拌，搅拌之后将精制培养液抽取出来。将大部分的不容性物质和脂容性物质去除。
然后，再将木炭磨成粉末，加入精制培养液，让炭吸收青霉素。将吸收了青霉素的炭放在分离管柱之类的容器内，以蒸馏水及酸性水洗净，然后用碱性水冲洗。那么分划出来的青霉素便会被分划在某个部分，浓缩再溶解出来，这就是分离管柱色层分离法。
看似简单，实则极其困难。首先成功率很低，十瓶溶液中，只能提取出一两瓶青霉素。
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